市售纯牛奶乳清雌二醇和孕酮含量分析

      该文已刊登在《食品科学》2010, 31(6): 252-254.

徐庄剑，马亚萍，李莉华，王 丰，樊 黎，庞兴甫，谢书艳

（无锡市第四人民医院 江苏 无锡 214062) 

摘  要：目的：初步调研市售纯牛奶雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量现状。方法：收集同季节6个品牌(A、B、C、D、E和F品牌，各品牌随机采集6个批号)共36个批号市售纯牛奶，采用免疫化学发光分析法检测经硫酸酯酶水解的乳清总E2(TE2)和P4。结果：6个品牌乳清TE2差异无统计学意义；F品牌乳清P4高于C品牌(P<0.05)，其余各品牌间差异均无统计学意义。36个批号中，乳清TE2和P4最大值与最小值之比分别为2.32和6.67。A、B、C、D、E和F品牌批号间乳清TE2的最大值与最小值之比分别为1.38、1.60、1.82、1.79、2.17和1.68，其P4的最大值与最小值之比分别为3.19、5.98、2.89、1.38、1.86和1.67。6个品牌的乳清TE2和P4均值的最大值与最小值之比分别为1.25和3.05。结论：市售纯牛奶品牌间乳清P4存在差异，且同品牌不同批号波动较大；批号间乳清TE2也有一定差异。江南大学附属医院儿科徐庄剑

关键词：牛奶；乳清；雌二醇；孕酮；免疫化学发光分析法

Contents of Estradiol and Progesterone in Whey of Commercial Whole Milk

XU Zhuang-jian，MA Ya-ping，LI Li-hua，WANG Feng，FAN Li，PANG Xing-fu，XIE Shu-yan

 (Wuxi the 4th People's Hospital, Wuxi      214062, China)

Abstract：Objective: To investigate the contents of estradiol (E2) and progesterone (P4) in commercial whole milk. Methods: Six lot numbers of commercial whole milk were collected randomLy for every brand during the same season, and 6 brands (A, B, C, D, E and F) were investigated. Total E2 (TE2) and P4 in milk whey hydrolyzed by sulfatase solution were assayed by immunochemiluminometric assays. Results: There was no statistically significant difference in TE2 among 6 brands. P4 in brand F was higher than that in brand C (P < 0.05), and there were no differences among other brands, respectively. Maximum/minimum for TE2 and P4 among 36 lot numbers were respectively 2.32 and 6.67. Maximum/minimum for TE2 among lot numbers about brand A, B, C, D, E and F were respectively 1.38, 1.60, 1.82, 1.79, 2.17 and 1.68, and for P4 were respectively 3.19, 5.98, 2.89, 1.38, 1.86 and 1.67. Maximum/minimum for mean TE2 and P4 among 6 brands were respectively 1.25 and 3.05. Conclusions: There is significant difference in P4 of milk whey among 6 brands, and there is fluctuation among 6 lot numbers at the every brand. And there is also difference in TE2 of milk whey among lot numbers.

Key words：milk；whey；estradiol；progesterone；immunochemiluminometric assays

随着对环境激素的重视，关注食源性激素与人类健康关系的学者日益增多，尤其是牛奶。牛奶中含有相当量的雌性激素，GANMAA D等[1]学者认为现在消费的牛奶中雌性激素含量较100年前明显增加；本课题组[2]前期对我国6个品牌现代市售纯牛奶中的游离E2(estradiol，E2)和孕酮(progesterone，P4)进行检测，显示4/6品牌的雌性激素水平较高，2/6品牌与传统牛奶接近，最高的E2是最低的4.8倍，最高的P4是最低的2.5倍。牛奶的消费与成人某些激素相关性肿瘤的发生有一定相关性[1, 3]。目前对于牛奶的安全性管理和相关研究大多集中在其微生物[4]、重金属[5]、农药[6]和抗生素残留[7]等指标方面，有关牛奶中的雌性激素尚无官方管理标准。本研究应用免疫化学发光分析法(immunochemiluminometric assays，ICMA)检测无锡市区销售同季节6个品牌市售纯牛奶乳清总雌二醇(total estradiol，TE2)和P4，旨在初步调研市售纯牛奶中雌性激素现状，为牛奶中雌性激素的安全性研究提供基础数据。

1    材料与方法

1.1  材料、试剂与仪器 

收集同季节(2～4月份)无锡市区销售的本地和外地生产的新鲜纯牛奶，共6个(A、B、C、D、E和F)品牌，每个品牌6个批号(每月随机抽取2个批号)，共36份，－20℃储存，待测。

硫酸酯酶  美国Sigma公司；ACCESS全自动微粒子免疫化学发光分析仪及配套试剂  美国Beckman公司。        

1.3  检测项目及方法

应用ICMA检测市售纯牛奶乳清TE2和P4。奶液中的E2有游离型和结合型两种形式，结合型主要与硫酸根离子结合，因此先用硫酸酯酶水解法将结合型E2转变为游离型E2，再检测乳清TE2水平[8]，具体方法：取奶样2mL，离心(12000r/min)90min，离心成乳清后直接检测P4；同时抽取乳清0.25mL，加入0.7mL乙酸钠缓冲液后，再加入0.05mL硫酸酯酶溶液(含50IU硫酸酯酶)，在37℃水浴下孵育21h，检测上述混合液(乙酸钠为100mmol/L，氯化钠为0.02%)中的E2，乳清TE2=所测浓度/0.25。

1.4  统计学处理                                               

应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计量资料用均数±标准差( )表示。各组实验数据均进行正态性检验(Shapiro-wilk法)和方差齐性检验(Levene法)，若符合正态分布和方差齐性，则采用方差分析(one-way ANOVA)，均数间两两比较采用多个样本均数间的两两比较(Student-Newman-Keuls检验)；若不符合正态分布或方差不齐，则采用秩转换的非参数检验，多个样本间均数比较采用Kruskal-Wallis H检验，多个样本均数间两两比较采用Nemenyi法检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2    结果与分析

2.1  6个品牌市售纯牛奶乳清雌性激素水平

6个品牌乳清TE2差别均无统计学意义(F = 0.836，P ＞ 0.05)。除F品牌乳清P4高于C品牌(χ2C, E = 13.48，P ＜ 0.05)外，其余各品牌间乳清的P4水平差别均无统计学意义(P ＞ 0.05) (表1)。

表1   6个品牌市售纯牛奶乳清雌性激素水平( )

Table 1  The concentrations of female sex hormones in milk whey of 6 brands ( )

雌性激素

质量浓度
 A品牌

(n=6)
 B品牌

(n=6)
 C品牌

(n=6)
 D品牌

(n=6)
 E品牌

(n=6)
 F品牌

(n=6)
 
TE2(pg/mL)
 186 ± 17.11
 159.33 ± 29.22
 169.33 ± 36.63
 184.00 ± 38.20
 176.6 ± 51.1
 199.3 ± 42.5
 
P4(ng/mL)
 1.39 ± 0.54
 1.66 ± 1.05
 0.92 ± 0.44
 2.45 ± 0.31
 2.64 ± 0.51
 2.81 ± 0.46★
 

注：A、B、C、D、E和F分别为6个市售纯牛奶品牌代号；★.与C品牌相比 P < 0.05。

2.2   6个品牌每袋市售纯牛奶乳清雌性激素水平和含量波动范围

36个批号乳清TE2(pg/mL)和P4(ng/mL)均值分别为179.11 ± 36.92 和1.98 ± 0.90, 品牌间TE2和P4均值的最大值与最小值之比分别为1.25和3.05。

A、B、C、D、E和F品牌批号间乳清TE2的最大值与最小值之比分别为1.38、1.60、1.82、1.79、2.17和1.68，其P4的最大值与最小值之比分别为3.19、5.98、2.89、1.38、1.86和1.67。同品牌乳清TE2和P4波动最大的分别为E和B品牌，最大值与最小值之比分别为2.17和5.98。在36个批号中，乳清TE2的最大值(于E品牌中)是最小值(于C品牌中)的2.32倍；乳清P4的最大值(于E品牌中)是最小值(于B品牌中)的6.67倍(见表2)。

表2   6个品牌每袋市售纯牛奶乳清雌性激素水平和含量波动范围

品牌
 容积/mL
 TE2
 P4
 
质量浓度/pg/mL
 每袋含量/ng
 质量浓度/ng/mL
 每袋含量/μg
 
A
 245
 148 ～ 204
 36.26 ～ 49.98
 0.67 ～ 2.14
 0.16 ～ 0.52
 
B
 200
 120 ～ 192
 24.00 ～ 38.40
 0.49 ～ 2.93
 0.10 ～ 0.59
 
C
 220
 112 ～ 204
 26.64 ～ 44.88
 0.53 ～ 1.53
 0.12 ～ 0.34
 
D
 220
 132 ～ 236
 29.04 ～ 51.92
 2.01 ～ 2.78
 0.44 ～ 0.61
 
E
 220
 120 ～ 260
 26.40 ～ 57.20
 1.76 ～ 3.27
 0.39 ～ 0.72
 
F
 200
 148 ～ 248
 29.60 ～ 49.60
 1.95 ～ 3.26
 0.39 ～ 0.65
 
Table 2  The concentrations and contents of female sex hormones in whey in a bag of commercial whole milk for 6 brands

注：A、B、C、D、E和F分别为6个市售纯牛奶品牌代号。

3    讨  论

人们消费的现代市售纯牛奶雌性激素含量较其100年前传统牛奶(来自产后奶牛)明显增高。其原因除饲养方法[3]和奶牛品种[9]不同外，主要与妊娠奶牛奶有关。奶牛几乎在整个怀孕期间持续泌乳以增加产奶量，尤其是妊娠后期，牛奶中的雌性激素也因此增加[1]。据估计大约75％的市售牛奶来源于妊娠奶牛奶[8]。

FaustinI等[10]报道的诊断奶牛是否怀孕的牛奶乳清(酶联免疫法)P4截断值为0.259ng/mL；本研究应用ICMA检测的36个批号乳清P4(ng/mL)最小值和均值分别为0.49和1.98，虽检测方法不同，但按上述结果推测，很可能36个批号乳清P4相当部分在妊娠奶牛奶范围；据牛奶中雌酮、TE2和TE3占雌激素比例分别约为7:2:1及奶牛妊娠第41～60d乳清硫酸雌酮浓度达151pg/mL[8]推测，奶牛妊娠第41～60 天乳清TE2约为43pg/mL，在本研究所有批号中乳清TE2(pg/mL)最小值和均值分别为112和179.11，亦提示其很可能相当部分在妊娠奶牛奶范围，因此本次调研的品牌可能均含有妊娠奶牛奶，支持上述大约75％的市售牛奶来源于妊娠奶牛奶的观点。

本研究显示市售纯牛奶品牌间乳清P4存在差异，且同品牌不同批号波动较大，批号间乳清TE2也有一定差异，此种差异很可能与妊娠奶牛奶含量或奶牛所处妊娠时期有关。

现代市售纯牛奶与人类健康的研究仅见流行病学[1, 3]方面的文献，有关动物研究也较少，且有分歧。Ganmaa等[8]动物实验研究未发现现代牛奶对大鼠亲代和子代生殖功能有明显影响，但子代中有1例出生时即死亡，3例有骨骼异常。李湘鸣等[9, 11]的研究亦未发现牛奶中雌激素样物质对雌、雄大鼠生殖腺有明显影响。本课题组前期系列实验研究显示：喂食妊娠奶牛奶或以妊娠奶牛奶为主的市售纯牛奶可使雌性幼鼠24 h尿雌三醇和P4排泄增多[12-13]；对雄性幼鼠睾丸生精上皮和精囊腺的发育可能有一定的影响，并可能波及血清睾酮水平[14]；还可能降低雄性幼鼠血清总胆固醇作用[15]和升高雌性幼鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平[16]。

妊娠奶牛奶成分复杂，除含有雌性激素外，还可能含有类雌性激素样物质和促进雌性激素分泌的物质，当然也可能含有拮抗雌性激素或抑制其分泌的物质。现代市售纯牛奶中的雌性激素对人类有无影响及如何影响尚待进一步相关临床和动物实验研究。

参考文献：

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[12]  袁丽君, 徐庄剑, 赵建伟, 等. 妊娠奶牛奶对雌性幼鼠尿雌三醇和孕酮的影响[J]. 中国公共卫生, 2007, 23(10): 1225-1227.

[13]  袁丽君, 徐庄剑, 胡瑜, 等. 牛奶中雌性激素样物质对雌性幼鼠尿雌三醇和孕酮的影响[J]. 现代预防医学, 2007, 34(23): 4498-4501.

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收稿日期：2009-05-27

基金项目：第五批（2007年度）苏州大学医学发展基金项目(21)

作者简介：徐庄剑(1959—)，男，主任医师，教授，学士 研究方向小儿内分泌。